Tovuq embrionlarida viruslarni etishtirish. Tovuq embrioni Tovuq embrionini virus bilan yuqtirish usullari
tovuq embrioni tovuq embrioni
(CE) - embrion rivojlanishining turli bosqichlarida tovuq embrioni. Mikrobiolda. Amaliyot viruslar, rikketsiya va ba'zan bakteriyalarni ajratish, etishtirish va aniqlash uchun ishlatiladi. Laboratoriya maqsadlari uchun yangi, urug'langan, yaxshi shaffof va yorilishsiz EK qobiqlari tanlanadi. Kuluçka 37-37,5 ° C, nisbiy namlik 63-65% da yaxshi havalandırılan inkubatorlar yoki termostatlarda tuxumning to'mtoq uchi yuqoriga ko'tarilgan tripod uyalarida amalga oshiriladi. INFEKTSION uchun aniq qon tomirlari, sarig'i sumkasi va harakatlanuvchi soyasi bo'lgan 4-13 kunlik embrionlar tanlanadi. INFEKTSION oldidan tuxum qobig'i spirtli ichimliklar bilan ishlanadi, yondiriladi va in'ektsiya joyida (ko'pincha havo kamerasi ustida) ular 2% yod damlamasi bilan surtiladi. Material yoki tadqiqot. to-ru kiritiladi, qobiqni ochadi yoki ochmaydi, sarig'i qopiga (rikketsiya), allantoik yoki amniotik bo'shliqlarga (ko'pchilik viruslar), xorion-allantoik membranaga qo'llaniladi. Kamroq, to-ru embrionning tanasiga yoki tomir ichiga yuboriladi. Infektsiyalangan EClar mikrob turiga va tadqiqot maqsadlariga bog'liq bo'lgan sharoitlarda va muddatlarda termostatga joylashtiriladi. INFEKTSION natijalari bo'yicha ba'zi ma'lumotlar mikroskop ostida EK ning tashqi tekshiruvi (tomir in'ektsiyasi, harakatchanlikni yo'qotish va boshqalar) orqali olinishi mumkin. Biroq, aksariyat hollarda Idoralar ochiladi. Buning uchun alkogol va yod damlamasi bilan ishlov berilgandan so'ng, qobiq havo qopchasi chegarasidan yuqorida kesiladi, allantoik, so'ngra amniotik suyuqlik Pasteur pipetkasi yoki shprits bilan so'riladi, tomirlar va sarig'i shikastlanmaydi. xalta. Embrion va xorionlantoik membrana qobiqdan chiqariladi, steril stakanlarga joylashtiriladi, steril distillat bilan yuviladi. suv va tekshiring. Embrion va uning suyuqliklarini o'rganishning keyingi kursi mikrob yoki virus turiga va tajriba maqsadlariga bog'liq.
(Manba: Mikrobiologiya atamalari lug'ati)
Boshqa lug'atlarda "Tovuq embrioni" nima ekanligini ko'ring:
EMBRİOTOKSIKLIK- embriotoksiklik, jismoniy, biologik, kimyoviy va boshqa vositalarning rivojlanayotgan embrionga salbiy ta'sir ko'rsatish qobiliyati. Turli moddalarning embriotoksik ta'siri ayollarga ta'sir qilish orqali aniqlanadi ... ... Veterinariya entsiklopedik lug'ati
"Tovuqlar" bu yerga yo'naltiradi; boshqa maʼnolarga ham qarang. ? Uy tovuqlari ... Vikipediya
Tovuqlar Tovuqlar har qanday hovlining bezakidir Ilmiy tasnifi Shohlik: Hayvonlar Turi: Chordatlar sinfi ... Vikipediya
Gripp viruslari jo'ja embrionlarida ko'payishi aniqlangandan beri bu usul virusologiyada keng qo'llanila boshlandi, chunki undan foydalanish oson va qimmat emas.
7-9 kunlik tovuq embrionlaridan foydalaning (to'liq rivojlanish tsikli 21 kun).
Infektsiyadan oldin sirt spirt, yod eritmasi bilan ishlanadi, qobiqda teshik ochiladi va steril shprits bilan infektsiyalanadi.
INFEKTSION usullari: amniotik bo'shliqda, allantoik bo'shliqda yoki sariq qopda. Viruslar mos keladigan membranalarda ko'payadi, bo'shliq suyuqligida to'planadi, keyinchalik ular keyingi tadqiqotlar uchun to'planishi mumkin.
Embrionlar 37°C da yetishtiriladi. 3 kun, keyin qobiq yana qayta ishlanadi, embrion steril asboblar bilan ochiladi va virus o'z ichiga olgan suyuqlik yig'iladi. INFEKTSION va otopsiya bo'yicha barcha ishlar qutida amalga oshiriladi.
Hujayra kulturalarida etishtirish.
So'nggi o'n yilliklarda virusologiyada hujayra madaniyati qo'llanildi, bu viruslarning ancha keng doirasini etishtirish va o'rganish imkonini berdi, chunki barcha inson viruslarini hayvonlar yoki embrionlarda ajratib bo'lmaydi. Shunday qilib, zamonaviy virusologiyada hujayra madaniyati qo'llaniladi, ularning ko'plari hozirda olingan.
Hujayra kulturalarining navlari
a) asosiy embrion to'qimalardan, uni maydalash, hujayralarni ajratish (ajratish) va keyingi etishtirish uchun tripsin bilan davolash orqali olinadi.
in vitro maxsus kulturali suyuqlik.
b) transplantatsiya qilingan- o'simta to'qimalaridan olinadi, ular faqat madaniy muhit va idishlarni o'zgartirib, cheksiz ravishda etishtirish mumkinligi bilan farqlanadi.
O'stirish paytida shisha ustida bir qatlam olinadi. : ya'ni hujayralarning bir qatlami.
Endi bu hujayralarni shubhali virus bilan yoki allaqachon mavjud bo'lgan viruslar bilan sinov materiali bilan yuqtirish mumkin. Infektsiyalangan va infektsiyalanmagan hujayrali idishlar 37 daraja haroratda termostatda o'stiriladi.
Hujayra madaniyatida virionlarni to'plash jarayoni taxminan 48 - 72 soat davom etadi.
Tegishli madaniyatlar bilan deyarli barcha inson viruslarini etishtirish mumkin.
Tadqiqotning keyingi bosqichi viruslarni ko'rsatish va identifikatsiya qilishdir.
Ko'rsatish usullari.
Ko'rsatkich - bu to'g'ridan-to'g'ri sinov materialida yoki madaniyat suyuqligida yoki infektsiyalangan hujayralarda viruslarni aniqlash.
I. Agar virionlar suyuqlikda bo'lsa, u holda ularni gemagglyutinatsiya reaktsiyasi yordamida aniqlash mumkin.
Reaktsiyaning mohiyati: viruslarning ba'zi turlari har qanday qizil qon hujayralarini o'z-o'zidan bir-biriga yopishib olishi mumkin (ya'ni gemagglyutinatsiyaga olib keladi). Masalan, gripp virionlari tovuq eritrotsitlarini, ayrim adenoviruslar kalamush eritrotsitlarini yopishtiradi va hokazo.
Shunday qilib, sho'r suvda eritrotsitlar suspenziyasidan foydalanib, virusni o'z ichiga olgan suyuqlikda viruslarni aniqlash mumkin.
II. Agar viruslar hujayra madaniyatida ko'paysa, lekin gemagglyutinatsiya qiluvchi bo'lsa, ularni gemodsorbtsiya reaktsiyasi yordamida aniqlash mumkin: kulturaga qizil qon hujayralari suspenziyasi qo'llaniladi, inkubatsiya qilinadi, drenajlanadi - agar kultura infektsiyalangan bo'lsa, qizil qon tanachalari paydo bo'ladi. to'g'ridan-to'g'ri infektsiyalangan hujayralarga yopishib oling - buni yorug'lik mikroskopida ko'rish mumkin.
III. Boshqa ta'sirlar:
a) viruslar monoqatlamning buzilishiga olib keladi - bu virusning sitopatogen ta'siri - CPE deb ataladi.
b) viruslar hujayralarda morfologik o'zgarishlarni keltirib chiqaradi: hujayra ichidagi yoki yadro ichidagi qo'shimchalar, sintsitium, simplastlar hosil bo'lishi (ya'ni hujayra membranalarining shikastlanishi tufayli bir nechta hujayralarning bir shaklda birlashishi).
Ma'lum bo'lgan viruslarning aksariyati jo'ja embrionida ko'payish qobiliyatiga ega (4-rasm). Embrionlar virus turiga, infektsiya usuliga va tadqiqot maqsadlariga qarab 8 dan 14 kungacha qo'llaniladi. Gripp viruslari 9-10, chechakka qarshi vaktsinalar - 12, parotit - 7 kunlik tovuq embrionlarida etishtiriladi. Tovuq embrionlarida virusning ko'payishi embrionning turli qismlarida sodir bo'ladi, bu virusning tropizmining o'ziga xos xususiyatlari bilan bog'liq. Tovuq embrionida virusni etishtirish usuli sanoatda etishtirishda keng qo'llaniladi.
Tovuq embrionining tuzilishi va infektsiya usullari: 1 - amnionda; 2 - allantoik bo'shliqqa; 3 - sarig'i qopchasida. (Mikrobiologiya va immunologiya. Vorobyov A.A. tahriri ostida - M. - 1999).
Qobiq yoki ona to'qimalariga qo'shni bo'lgan va shuning uchun embrion va uning muhiti o'rtasida almashinuv joyi bo'lib xizmat qiladigan eng tashqi embriondan tashqari membrana deyiladi. Chorion. Tuxum qo'yadigan turlarda chorionning asosiy vazifasi nafas olish gazlari almashinuvini amalga oshirishdir. Sutemizuvchilarda xorion moddalarning nafas olish va oziqlanishi, chiqarilishi, filtrlanishi va sintezida ishtirok etadi. Ibtidoiy organizmlarda xorion ikkilamchi membrana, rivojlangan organizmlarda esa homila pardasi hisoblanadi. Xorion va amnion orasidagi bo'shliq chorionamniotik hisoblanadi.
Amnion(yunoncha Amnion), Amniotik qop yoki Suv pardasi - sudralib yuruvchilar, qushlar, sutemizuvchilar embrionlaridagi embrion membranalardan biri.
Evolyutsion tarzda, amnion embrionlarni suv muhitidan tashqarida rivojlanish jarayonida quritishdan himoya qilish uchun paydo bo'lgan. Shuning uchun tuxum qo'yuvchi umurtqali hayvonlar (sudraluvchilar va qushlar), shuningdek sudraluvchilardan kelib chiqqan sutemizuvchilar amniotlar ("Tuxum qobig'i bo'lgan hayvonlar") deb tasniflanadi. Umurtqali hayvonlarning oldingi sinflari va supersinflari (sefaloxordatlar, siklostomlar, baliqlar, amfibiyalar) suv muhitida tuxum qo'yadi, shuning uchun ular suv qobig'ini talab qilmaydi. Hayvonlarning bu sinflari anamniyalar guruhiga birlashtirilgan. Anamniyadan farqli o'laroq, amniotalar ko'payish va erta rivojlanish uchun suv muhitini talab qilmaydi, shuning uchun amniotlar suv havzalariga bog'lanmagan. Bu amnionning evolyutsion roli.
Sutemizuvchilarning tug'ilishi paytida suv qobig'i yorilib, suv oqib chiqadi va yangi tug'ilgan chaqaloqning tanasidagi amnion qoldiqlari ko'pincha "ko'ylak" deb ataladi, bu qadim zamonlardan beri omad va boshqa xurofotlarning belgisi bo'lib kelgan ( shuning uchun, xususan, "ko'ylakda tug'ilganlar" haqida rus maqoli ).
Allantois (yunoncha. allantoeid?s — kolbasasimon) — yuqori umurtqali hayvonlarning embrion nafas olish organi; embrionning orqa ichakchasidan rivojlanadigan germinal membrana. Bundan tashqari, allantois embrionning atrof-muhit bilan gaz almashinuvida va suyuq chiqindilarni chiqarishda ishtirok etadi. Allantois boshqa embrion membranalar - amnion va xorion bilan birgalikda yuqori umurtqali hayvonlar - sutemizuvchilar, qushlar va sudraluvchilarning o'ziga xos xususiyati hisoblanadi.
Tuxumdor qushlar va sudralib yuruvchilarda allantois embrion atrofida qobiq devorlari bo'ylab rivojlanadi. Mezoderma deb ataladigan tashqi qatlamida u tashqi muhit bilan o'zaro ta'sir qiluvchi keng qon tomirlari tarmog'ini hosil qiladi. Sutemizuvchilarda allantois kindik ichakchasining bir qismidir.
Rivojlanayotgan tovuq embrionini yuqtirishning bir necha usullari mavjud: xorioallantoik membranada, allantoik va amniotik bo'shliqlarda, sarig'i qopchasida va embrion tanasida.
Xorionlantoik membranadagi infektsiya membranalarda blyashka hosil qiluvchi viruslarni (emlash, chechak, herpes simplex viruslari) ajratish va etishtirish uchun ishlatiladi. Infektsiyadan oldin tuxumlar ovoskop bilan shaffof bo'lib, havo bo'shlig'i va chorioallantoik membrananing chegarasi qalam bilan belgilanadi. Tuxumning havo bo'shlig'i ustidagi yuzasi va infektsiya joyida spirt bilan artib, yondiriladi, yod bilan ishlov beriladi va havo qopining bo'shlig'ida teshik ochiladi.
INFEKTSION joyida qobiq qobiq membranasiga zarar bermaslik uchun chiqariladi, so'ngra xorionlantoik membranani shikastlamaslik uchun qisqa steril igna bilan teshiladi. Havo yostig'i bo'shlig'idan havo so'riladi. Virusli material (0,05 - 0,2 ml) xorionlantoik membranaga qisqa igna yoki Paster pipetkasi bilan tuberkulinli shprits bilan surtiladi. Qobiqdagi teshik steril qopqoqli shisha yoki bir xil kesilgan qobiq bo'lagi bilan yopiladi va qirralari bo'ylab eritilgan kerosin bilan to'ldiriladi. Infektsiyalangan embrionlar gorizontal ravishda stendga joylashtiriladi va termostatda inkubatsiya qilinadi. Embrionlar inkubatsiyadan 48 soat oldin ochiladi. Infektsiyalangan qobiqda turli shakldagi oq rangli shaffof dog'lar (blyashka) topiladi.
Allantoik bo'shliqda infektsiya. Allantoisga kiritilgan virus endodermal hujayralarda ko'payadi, so'ngra allantois suyuqligiga o'tadi. INFEKTSION quyidagi tarzda amalga oshiriladi: havo kamerasi ustidagi qobiqda skalpel yoki qaychi uchi bilan ponksiyon qilinadi, shundan so'ng vertikal yo'nalishdagi teshikdan shpritsli igna kiritiladi, u orqali o'tadi. chorionallantoik membrana va allantoik bo'shliqqa kiradi, material 0,1 ml hajmda AOK qilinadi va teshik kerosin bilan to'ldiriladi.
Sariq qopdagi infektsiya. Shu maqsadda 5-10 kunlik embrionlardan foydalaniladi. Eng ko'p ishlatiladigan ikkita infektsiya usuli mavjud. Birinchisiga ko'ra, material havo bo'shlig'i orqali kiritiladi. Tuxumning o'rtasida teshik ochilib, uchi o'ng tomonga to'mtoq bo'lgan stendga qo'yiladi va shpritsga qo'yilgan igna vertikal yo'nalishdagi teshikdan kiritiladi, igna xorionlantoik membrana, allantoik membranadan o'tadi. sarig'iga bo'shliq. Sariq qopchaga 0,1 dan 0,5 ml gacha virusli material yuborish mumkin. Infektsiyadan keyin qobiqdagi teshik kerosin bilan to'ldiriladi va embrion termostatga joylashtiriladi. Ikkinchi usulga ko'ra, havo bo'shlig'ining sarig'i yotadigan tomonida (embrionga qarama-qarshi tomonda) qobiq teshigi amalga oshiriladi, bu orqali yuqumli material yuboriladi. Ignaning yo'nalishi tuxumning o'rtasiga to'g'ri kelishi kerak.
Virusli material bilan kasallangan tovuq embrioni kiritilgan virusning tabiatiga qarab 2-3 kun davomida inkubatorga joylashtiriladi. Bemordan olingan namunalardan viruslar rivojlanishi uchun (masalan, grippni tashxislashda ishlatiladigan nazofarenksdan olingan tamponlar) tovuq embrioni yaxshi muhitni ta'minlaydi. O'zgarishlar turiga ko'ra, aytaylik, xorioallantoik membrananing to'qimalarida, biz qaysi virus bilan shug'ullanayotganimizni bevosita aniqlashimiz mumkin. Chechak va herpes viruslari juda xarakterli o'zgarishlarni beradi. Ba'zi viruslar jo'ja embrionining turli to'qimalarida juda intensiv ko'payadi va virusli kasalliklarni laboratoriya diagnostikasi uchun zarur bo'lgan virusli antijenlarni tayyorlash uchun boshlang'ich materialni beradi. Jo'ja embrionida ko'paygan viruslar o'n sakkiz turdagi emlash vaktsinalarini olish uchun boshlang'ich material sifatida ishlatilgan.
Zamonaviy virusologik laboratoriyalarda juda keng tarqalgan hujayra madaniyatining ijobiy tomonlariga qaramay, jo'ja embrioni ko'p hollarda o'zining asosiy ahamiyatini saqlab qoldi va hali ham ish uchun klassik material bo'lib xizmat qiladi. Tovuq embrionida virusning ko'rsatilishi embrionning o'limi, allantoik yoki amniotik suyuqlik bilan shishada ijobiy gemagglyutinatsiya reaktsiyasi, xorion-allantoik membranada o'choqli lezyonlar ("plakalar") shakllanishi bilan amalga oshiriladi. RHAda.
"Bakteriyalarni yetishtirish. Bakteriyalarni etishtirish usullari. Koloniya belgilari." fanining mazmuni:Virusni aniqlash uchun organ madaniyati. Virusli infektsiyalarni tashxislashda tovuq embrionlari. Chick embrion virusi bilan infektsiya. Chick embrion virusi bilan yuqtirish usullari.
Barcha turdagi hujayralar monoslon shaklida o'sishga qodir emas, ba'zi hollarda differensial hujayralarni saqlab qolish faqatgina mumkin. organ madaniyati. Odatda bu maxsus funktsiyaga ega bo'lgan to'qimalarning suspenziyasi bo'lib, omon qolgan to'qimalar madaniyati deb ham ataladi.
Virusli infektsiyalarni tashxislashda tovuq embrionlari
tovuq embrionlari(11-20-rasm) ba'zi viruslarni (masalan, gripp va qizamiq) etishtirish uchun deyarli ideal modellardir. Embrionning yopiq bo'shlig'i mikroorganizmlarning tashqaridan kirib borishiga, shuningdek, spontan virusli infektsiyalarning rivojlanishiga to'sqinlik qiladi. Embrionlar patologik materialdan viruslarni birlamchi ajratish uchun ishlatiladi; ularni o'tkazish va saqlash, shuningdek virusning kerakli miqdorini olish uchun. Ba'zi patogenlar (masalan, herpesviruslar) xarakterli o'zgarishlarni keltirib chiqaradi (ular kasallikni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin). INFEKTSION chorion-allantoik membranada, amniotik yoki allantoik bo'shliqda yoki sarig'i qopchasida amalga oshiriladi.
Korion-allantoik membranada virusli infektsiya. Odatda 10-12 kunlik embrionlardan foydalaniladi. Tuxumlar uzatilgan nurda ko'riladi, havo qopining lokalizatsiyasi qayd etiladi va tomirlarsiz joy tanlanadi. Qobiqning bir bo'lagini ehtiyotkorlik bilan olib tashlang, tashqi qobiqni bo'shating va yumshoq bosim bilan tozalang. Keyin havo yostig'ining chetida teshik ochiladi. Bu teshikdan so'rilganda xorion-allantoik membrana tashqi qobiqdan chiqib ketadi. Sinov materiali unga qo'llaniladi, bakteriyalar va protozoalardan tozalanadi (bakterial filtrlardan o'tadi va bakteritsidlar bilan ishlov beriladi). Amniotik bo'shliqda infektsiya. Odatda, 7-14 kunlik embrionlar qo'llaniladi, ularda xorion-allantoik membrananing eksfoliatsiyasidan so'ng (yuqoriga qarang) teshik kengaytiriladi, amniotik membrana pinset bilan ushlanadi va xorion-allantoik membrana orqali chiqariladi. U orqali test materiali amniotik bo'shliqqa kiritiladi.
Allantoik bo'shliqda virusli infektsiya. 10 kunlik embrionlar qobiq va pastki membranalarda qilingan teshiklar orqali infektsiyalanadi (yuqoriga qarang).
Sariq qopdagi virusli infektsiya. 3-8 kunlik embrionlardan foydalaniladi, bu yoshda sarig'i qop tuxumning deyarli butun bo'shlig'ini egallaydi. INFEKTSION havo qopchasidagi teshik orqali amalga oshiriladi.
Guruch. 11-20. Rivojlanayotgan jo'ja embrionining sxematik tasviri.
Jo'ja embrioni virusi bilan kasallanish natijalarini kuzatish va qayd etish
Tarkib virusli material sifatida ishlatilishi mumkin sarig'i qop, allantoik va amniotik suyuqliklar yoki butun embrion, atrofdagi to'qimalar bilan birga bo'laklarga bo'linadi. Chorion-allantoik membranada xarakterli lezyonlarni aniqlash uchun qobiq va tashqi qobiq chiqariladi. Keyin membrana olib tashlanadi va steril suvga joylashtiriladi. Lezyonlar tabiati qorong'u fonda o'rganiladi.
Darsning maqsadi
Talabalarni viruslarni yetishtirish uchun tovuq embrionlarini tanlash usullari bilan tanishtirish.
Uskunalar va materiallar
Tovuq embrionlari 9-12 kunlik inkubatsiya yoshi, ovoskop, spirtli tamponlar, embrionlar uchun stendlar, pinset, qaychi, yopishqoq gips, ignalar, shpritslar, qalamlar, zarblar, ignalar, jadvallar, diagrammalar, multimedia uskunalari, taqdimotlar MS Office PowerPoint dars mavzusi bo'yicha.
Darsning metodikasi va mavzu bo'yicha uslubiy ko'rsatmalar
O'qituvchining tushuntirishi
Tovuq embrionlarida viruslarni etishtirish virusni birlamchi izolyatsiya qilishning eng qulay va qulay usuli hisoblanadi. Ushbu infektsiya usulini qo'llash amaliyoti boshqa usullarga nisbatan bir qator afzalliklarni ko'rsatdi. 5-12 kunlik inkubatsiya davridagi embrionlar infektsiya uchun ishlatiladi.
TOVUQ EMBRIONALARINI BIOLOGIK OB'YEKTLAR SIFATIDA AVZUVLARI VA KAMCHLARI.
Viruslarni tovuq embrionlarida etishtirish kasal hayvonlardan va atrof-muhit ob'ektlaridan viruslarni birlamchi ajratish uchun ham, keyinchalik laboratoriya sharoitida viruslarni etishtirish uchun ham eng qulay va qulay usuldir. Bu usul viruslar va antikorlarni aniqlash, shuningdek, vaktsinalarni tayyorlash va diagnostika uchun keng qo'llaniladi. Qo'llash amaliyoti laboratoriya hayvonlarida viruslarni etishtirishda ushbu usulning bir qator afzalliklarini ko'rsatdi. Ma'lumki, virusologik tadqiqotlarda keng qo'llaniladigan oq sichqonlar o'z-o'zidan bir qator virusli infektsiyalar bilan kasallanishi mumkin: ektromeliya, limfotsitar xoriomeningit, Teylor ensefaliti, virusli pnevmoniya, Sendai virusi va boshqalar, bu ishni juda murakkablashtiradi va ko'pincha. olingan natijalarni baholashda noto'g'ri xulosalar chiqarishga olib keladi. Tovuq embrionlarida viruslarni etishtirish yuqoridagi qiyinchiliklarni asosan bartaraf etadi. Shu bilan birga, tovuq embrionidan laboratoriya hayvonlaridan ko'ra ko'proq virus olish mumkin. Tovuq embrioni sinov materiali kiritilganda muqarrar bo'lgan turli xil ta'sirlarga nisbatan ko'proq hayotiylik va qarshilikka ega. Embrionlar bilan ishlash va asepsiya qoidalariga rioya qilishda ma'lum mahoratga ega bo'lgan holda, ularning o'limi ahamiyatsiz. Embrionlarning eng katta chiqindilari material amniotik bo'shliqqa va sarig'i qopiga kiritilganda sodir bo'ladi, ammo bu holatlarda ham zarur inkubatsiya shartlari bajarilsa, u 10-15% dan oshmaydi.
Tovuq embrionlari tirik tizim sifatida 1930-yillarda virusologik amaliyotga kirgan. Ulardan foydalanish laboratoriyada yetishtiriladigan viruslar assortimentini kengaytirdi, tovuq embrionlari laboratoriya hayvonlariga nisbatan bir qator afzalliklarga ega ekanligi virusologiya oldida turgan muammolarni yanada muvaffaqiyatli hal qilish imkonini berdi: 1) qobiq va qobiq membranasini ishonchli himoya qiladi. tashqi muhitdan bakterial infektsiyadan embrion; 2) embrionlarning muhim afzalligi, shuningdek, ularning viruslarning keng doirasiga nisbatan yuqori sezuvchanligi bo'lib, bu himoya mexanizmlarining etarli darajada rivojlanmaganligi bilan izohlanadi; 3) tovuq embrionlari parrandachilik fermalari va inkubatorlarning keng tarmog'i rivojlanishi tufayli oson kirish mumkin bo'lgan ob'ektdir; 4) tovuq embrionlari tejamkor, parvarish va oziqlantirishni talab qilmaydi.
Asosiy kamchiliklar: 1) ushbu tirik tizimning bepushtligini to'liq kafolatlay olmaslik, chunki embrionlar tarkibida viruslar va boshqa patogen agentlarni (tovuqlarning yuqumli bronxitlari, Nyukasl kasalligi, gripp, leykemiya, xlamidiya va mikoplazma viruslari) olib yurishi mumkin. . Ularning mavjudligi tadqiqot natijalarini buzishi mumkin; 2) tovuq embrionlari barcha viruslarga sezgir emas.
TOVUQ EMBRIOLARINI FOYDALANISH MAQSADI
Tovuq embrionlari virusologiyada asosan laboratoriya hayvonlari bilan bir xil maqsadlarda qo'llaniladi, xususan:
– bioassay yordamida patologik materialda faol virusni aniqlash;
- virusning birlamchi izolyatsiyasi. Qushlarda kasalliklarni keltirib chiqaradigan viruslar, shuningdek, ba'zi sutemizuvchilar viruslari tovuq embrionlarida samarali tarzda ajratiladi va o'stiriladi;
– laboratoriyada viruslarni saqlash;
- virusni titrlash;
- laboratoriya tadqiqotlari va vaktsinalar uchun virusni to'plash;
- neytrallanish reaktsiyasida sinov ob'ekti sifatida.
TOVUQ EMBRIOLARIGA TALABLAR
Tuxumlarni virussiz fermalardan olish kerak. Urug'langan tuxumlarda, hatto klinik jihatdan sog'lom tovuqlardan ham, bu qushlarda topilgan turli viruslarni topish mumkin: Nyukasl kasalligi, yuqumli bronxit, yuqumli laringotraxeit, ensefalomielit, parainfluenza-2, poliartrit, chechak, arboviruslar, adenoviruslar va boshqalar Bu viruslarning mavjudligi. bir tomondan, diagnostik xatolarga olib kelishi mumkin, boshqa tomondan, aralashuv hodisasiga asoslanib, sinov namunasida virusning ko'payishini bostirish. Ba'zi viruslar bilan asemptomatik infektsiyalangan tovuqlardan virussiz embrionlar ham onadan sarig'i bilan olingan o'ziga xos antikorlar mavjudligi sababli ushbu virusning ta'siriga nisbatan kam sezgir yoki butunlay befarq bo'lishi mumkin. Virusni muvaffaqiyatli izolyatsiya qilish uchun embrionlari ishda ishlatiladigan tovuqlar kasallikka qarshi emlanmagan bo'lishi kerak, uning qo'zg'atuvchisi izlanadi. Tuxum qobig'i pigmentsiz, toza bo'lishi kerak (yuvib bo'lmaydi). Embrionning yoshi tanlangan infektsiya usuliga mos kelishi kerak.
Kuluçka davrida urug'lantirilgan tuxumlarda embrionlarning normal rivojlanishini ta'minlash uchun ma'lum bir harorat va namlikni saqlab turish kerak. Rivojlanayotgan embrionlar issiqlikka sovuqdan ko'ra yomonroq toqat qiladilar. Shuning uchun isitish tizimidagi qisqa muddatli (bir necha soat ichida) buzilish ko'p zarar keltirmaydi. Uzoq muddatli tanaffuslar uchun isitish kerak.
Inkubatsiya qilingan tuxumlar toza havoga erkin kirishlari kerak, bu esa shamollatish teshiklari orqali kiradi. Ular har doim ochiq bo'lishi kerak. Bir tuxum, odatda ishonganidek, kuniga 1 litr kislorod iste'mol qiladi, agar biz 21 kunlik inkubatsiya davrida embrionning jadal rivojlanishini eslasak, bu ajablanarli emas. Shuning uchun tuxumni bir-biriga yaqin, shuningdek, bir-birining ustiga qo'ymaslik kerak. An'anaviy termostatlar tuxumni inkubatsiya qilish uchun yaroqsiz. Faqat favqulodda holatlarda ular bu maqsadlar uchun ishlatilishi mumkin, lekin ayni paytda tez-tez ventilyatsiya qiling va kerakli namlikni ta'minlash uchun suv idishini ichkariga qo'ying.
Inkubatsiya uchun qo'yilgan tuxumlar 3-5 kundan keyin urug'lanmaganlarni tanlash uchun maxsus stol yoki qo'llanma (agar tuxum inkubator patnisidan olinmasa) chiroq yordamida yoritiladi. Leghorn tuxumlari virusologik ish uchun eng qulaydir, chunki ularning nozik oq qobig'i tarkibni yaxshiroq ko'rishga imkon beradi. Urug'lanmagan yoki o'lik embrionlarni o'z ichiga olgan tuxumlar inkubatordan chiqariladi. Urug'langan tuxumlarning nisbati ko'plab omillarga, jumladan, yilning vaqtiga qarab sezilarli darajada o'zgaradi: bahorda u eng yuqori, qishda esa eng past bo'ladi.
Ikkinchi marta embrionlar rejalashtirilgan infektsiya kuni shaffof bo'ladi. Bu davr virus turiga, shuningdek, uni kiritish yo'liga bog'liq. Oddiy (siyoh emas) qalam bilan qobiqda infektsiya joyini belgilang.
TOVUQ EMBRIONINING TUZILISHI
Odatda tovuq urug'langan tuxum qo'yadi, unda embrion blastula yoki erta gastrula bosqichida bo'ladi. Tuxum tovuqning tana haroratiga yaqin haroratgacha qizdirilsa, embrionning keyingi rivojlanishi sodir bo'ladi (15-rasm). Inkubatsiyaning 5-dan 12-kunigacha bo'lgan davrda tovuq embrionlari viruslarni yuqtirish uchun ishlatilishi mumkin.
15-rasm - Inkubatsiyaning 8-kunidagi tovuq embrionining sxematik kesimi: 1 - qobiq; 2 - qobiq membranasi; 3 - xorioallantoik membrana; 4 - allantoik bo'shliq; 5 - sarig'i qop; 6 - oqsil; 7 - havo kamerasi; 8 - embrionning tanasi; 9 - amniotik bo'shliq
Rivojlanayotgan jo'ja embrioni bo'lgan tuxum tashqi tomondan qattiq g'ovak qobiq bilan qoplangan bo'lib, unga qobiq membranasi mahkam yopishadi. Ikkinchisi tuxumning to'mtoq uchida ikkita varaqga bo'linadi, ular orasida havo kamerasi hosil bo'ladi. Embrionning tanasi eksantrik ravishda tuxumda yotadi, orqa tomoni qobiqqa yaqinroq, boshi havo kamerasiga qaratilgan. Embrion amniotik bo'shliqni to'ldiradigan amniotik suyuqlikka botiriladi va kindik ichakchasidagi sarig'i bilan bog'lanadi. Sarig'i ham eksantrik va embrionga nisbatan, xuddi bo'ylama o'qning boshqa tomonida joylashgan.
To'g'ridan-to'g'ri qobiq membranasi ostida amnion va sarig'i qopini qoplaydigan allantoik bo'shliq mavjud va 10-11-kunga kelib u tuxumning o'tkir uchida yopiladi. Rivojlanish jarayonida allantoik membran xorion bilan birlashadi va bitta xorionlantoik membranani (CAO) hosil qiladi. Tuxumning o'tkir uchida oqsilning qolgan qismi joylashgan.
Embrionning u yoki bu qismidagi infektsiya uning maksimal rivojlanish davrida, sezgir hujayralar soni eng ko'p bo'lgan davrda amalga oshiriladi.
Kuluçka jarayonida embrion tuzilmalarining o'lchamlari o'zgaradi, bu ko'p jihatdan ularning funktsional maqsadiga bog'liq va embrionning infektsiya uchun optimal yoshini aniqlaydi.
Shunday qilib, ozuqa moddalarining rezervuari sifatida sarig'i qopchasi inkubatsiya boshida eng katta hajmga ega, keyin esa (12-kundan keyin) embrion rivojlanishi bilan u kamayadi. Sariq xaltada inkubatsiyaning 5-7-kunigacha infektsiyalanadi.
Amniotik bo'shliq embrion rivojlanishi uchun bufer muhit bo'lib, uni inkubatsiyaning 5-kunida qoplaydi. Inkubatsiya davrining o'rtalarida suyuqlikning o'rtacha miqdori taxminan 1 ml ni tashkil qiladi.
6-10 kunlik embrionlar amniotik bo'shliqda infektsiya uchun ishlatiladi.
Allantoik bo'shliq metabolik mahsulotlarni to'plash uchun xizmat qiladi, unda siydik kislotasi tuzlari, fosfor va azotli birikmalar to'planadi. Embrionning o'sishi va rivojlanishi jarayonida allantoik suyuqlik kislotali bo'ladi. Allantoik bo'shliq embrion rivojlanishining 9-12-kunlarida maksimal hajmiga etadi, shuning uchun allantoik bo'shliqda infektsiya asosan inkubatsiyaning 9-11-kunlarida amalga oshiriladi.
Chorioallantoik membrana qon tomirlariga boy bo'lib, ular g'ovakli qobiqning ichki yuzasiga yaqindan yopishib, kislorod bilan to'yingan va embrionning nafas olish organi funktsiyasini bajaradigan embrion tanasini ta'minlaydi. HAO ning maksimal rivojlanishi 11-13-kunga etadi. Chorioallantoik membranada infektsiya inkubatsiyaning 10-12 kunida amalga oshiriladi.
TOVUQ EMBRIOSINI INFEKTSIONGA TAYYORLASH
Embrionlar yo'lda sovutilmasdan inkubatordan yetkaziladi. Laboratoriyada embrionlar termostatda 37 °C haroratda va 60-70% namlikda inkubatsiya qilinadi, bu termostatda suv bilan ochiq keng og'izli idishlarni o'rnatish orqali erishiladi. Termostatni shamollatish teshiklari ochiq bo'lishi kerak. Embrionlar havo kamerasi yuqoriga qarab maxsus stendlarga joylashtiriladi. Embrionlarning kun davomida yangi sharoitlarga moslashishiga ruxsat berish va transport stressidan keyin infektsiyani yuqtirish paytigacha ularning funktsiyalarini normallashtirish tavsiya etiladi. Agar laboratoriya o'z inkubatoriga ega bo'lsa, unda tovuq qo'ygan urug'langan tuxum 10 kun davomida qo'yish uchun mos keladi.
Jo'ja embrionlarini infektsiyaga tayyorlash qobiqni sham va dezinfektsiyalashni, shuningdek ish joyini tegishli ravishda tayyorlashni o'z ichiga oladi. Kandling - tuxumlarni etarlicha yorqin yorug'lik manbasiga (ovoskop) qarshi ko'rish, buning natijasida qobiqning yoritilmagan tomonida ichki tuzilmalardan soyalar hosil bo'ladi (16-rasm). Sham quyish qorong'i xonada amalga oshiriladi. Shu bilan birga, havo kamerasining chegarasi, embrionning joylashishi va avaskulyar zonaning maydoni 0,5x0,5 sm o'lchamdagi qobiqda grafit qalam bilan belgilanadi.Bu belgilar tanlashda ko'rsatma bo'lib xizmat qiladi. virus o'z ichiga olgan materialni joriy qilish uchun sayt. Shamlanganda embrionning tirik yoki o'lik ekanligi ham aniqlanadi. CAO tomirlarini yaxshi qon bilan to'ldirish bilan faol harakatlarni ko'rsatadigan embrionlar tirik hisoblanadi.
16-rasm - Tovuq embrionining inkubatsiyaning 10-kunida shamlanishi. Soyalar ko'rinadi: 1 - embrion; 2 - sarig'i qop; 3 - CAOning qon tomirlari; 4 - havo kamerasi; 5 - oqsil
Tovuq embrionlari aseptik sharoitda (yaxshisi qutida) yuqtiriladi. Oldindan qutida embrionlarning qobig'i yodlangan spirt bilan ishlanadi, so'ngra ular qutiga qayta-qayta artiladi, ba'zan ular ham olovlanadi - ular spirt bilan namlangan tampon alangasi bilan ishlanadi.
Embrionlar dezinfektsiyali eritma bilan namlangan 3-4 qatlamli gazli matoga sirlangan kyuvetaga joylashtirilgan maxsus tayanchlarda o'rnatiladi.
Ishda qaynatishda sterilizatsiya qilingan asboblar qo'llaniladi. Ular spirt solingan kavanozga solinadi va har bir qayta ishlatishdan oldin olovli olov bilan yondiriladi.
Namoyish
a) kasallangan laboratoriya hayvonlarida kasallikning klinik belgilari; b) laboratoriya hayvonlarini o'ldirish usullari; v) otopsiya usullari (talabalarning e'tiborini ichki organlar holatiga qaratish) va virusli materialni olish usullari; d) miya izlarini yasash texnikasi; e) kasallangan hayvon ochilgandan keyin ish joyini va murdani zararsizlantirish bo'yicha harakatlar.
Vazifalar
1. Tovuq embrionining tuzilishini o'rganing.
2. Tovuq embrionining ovoskopiyasini o'tkazing, uning hayotiyligini aniqlang va tabiiy shakllanishlar soyalarining chegaralarini belgilang.
3. Tovuq embrionlarini infektsiyaga tayyorlang.
Talabalarning mustaqil ishi
a) talabalarning har biri tomonidan yuqtirgan sichqonlarni rang belgisi bilan aniqlash, ularning klinik holatini tahlil qilish, o'ldirish, mum (parafin) tubi bilan kyuvetaga mahkamlash, otopsiya; b) patoanatomik o'zgarishlarni tahlil qilish, virusli material (parenximal organlar) olish, miyaning qatlam-qatlam izlarini tayyorlash.
Talabalar tovuq embrionining ovoskopiyasini o'tkazadilar, uning hayotiyligini aniqlaydilar va tabiiy shakllanishlar soyalarining chegaralarini belgilaydilar.
Darsni yakunlash
Keyingi dars uchun topshiriq
Nazorat savollari
1. Tovuq embrionining tuzilishi.
2. Virusologiyada nima uchun tovuq embrionlaridan foydalaniladi?
3. Rivojlanayotgan tovuq embrionining tuzilishi qanday?
